重組腸激酶
Cat.No.: REK08
CAS: 9017-74-8
EC: 3.4.21.9
儲(chǔ)存溫度：-20℃或以下
來源：重組牛腸激酶，大腸桿菌表達(dá)
蛋白序列：氨基酸序列與牛腸激酶輕鏈一致。
1.產(chǎn)品簡(jiǎn)介
雅心重組牛腸激酶是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段。該酶經(jīng)HPLC純化，純度高，特異性高，不含其他蛋白酶。腸激酶可以切割含有四個(gè)天冬氨酸的賴氨酸羧基端肽鍵：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 賴氨酸（DDDDK）?？梢栽谳^寬pH范圍（4.5-9.5）和較寬溫度范圍內(nèi)有效切割融合蛋白。腸激酶可去除位于蛋白質(zhì)N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標(biāo)簽。
2.產(chǎn)品特性
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來源 |
重組大腸桿菌 |
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外觀 |
澄清、無色至淡黃色液體 |
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活性 |
≥ 5.0 U/µl |
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純度（蛋白電泳） |
單一主條帶 |
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電泳（分子量） |
25.8 ±2.6 kDa |
單位定義：1U定義為在25℃，12h~16h之內(nèi)，將0.5mg保存于25mM Tris-HCl 8.0 緩沖液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。
3.推薦使用方法
1）25℃酶切條件：
按照酶活性定義，酶切條件舉例：
25mM Tris-HCl 8.0體系中：
融合蛋白 0.1-1mg/ml（蛋白總量50-100µg）
重組EK 0.1-0.2U
25℃過夜酶切，或完全酶切需16-24h，用SDS-PAGE檢測(cè)酶切效果。
2）4℃低溫酶切條件：
4℃能對(duì)底物進(jìn)行有效酶切，但需要將酶切時(shí)間延長至48-64h，或增加2-3倍酶量。
3）酶切優(yōu)化和放大
優(yōu)化：可以對(duì)酶切條件進(jìn)行優(yōu)化，例如緩沖液pH，融合蛋白濃度，EK的量，以及酶切時(shí)間，使融合蛋白能在穩(wěn)定條件下被酶切，用SDS-PAGE檢測(cè)酶切效果。
放大：選擇優(yōu)化后的反應(yīng)條件，按該條件等比例放大，用SDS-PAGE檢測(cè)酶切效果。
4.常見影響腸激酶活性的因素
在＞200mM 咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影響?？蓞⒄找韵峦扑]方法進(jìn)行酶切：
1）為獲得理想酶切結(jié)果，請(qǐng)將樣品透析到25mM Tris-HCl 8.0緩沖液中，再進(jìn)行酶切。
2）若不便透析，可將樣品稀釋，咪唑含量在100mM以下，NaCl濃度在50mM以下，甘油濃度小于5%以下進(jìn)行酶切，酶的用量與蛋白的比例不變（即1U酶切500µg蛋白）。
3）如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種，且不便去除，此時(shí)適當(dāng)增加酶量或延長酶切時(shí)間，也可達(dá)到較好酶切效果。
5.儲(chǔ)存和運(yùn)輸穩(wěn)定性
酶液儲(chǔ)存穩(wěn)定性：-20℃，24個(gè)月穩(wěn)定；25℃，一周內(nèi)，無活性損失。緩沖體系：50mM Tris-HCl，pH8.0，250mM NaCl，2mMCa2+，50%甘油。
酶液反復(fù)凍融穩(wěn)定性：反復(fù)凍融5次，無活性損失。
運(yùn)輸穩(wěn)定性：藍(lán)冰保溫運(yùn)輸，穩(wěn)定。
6.產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
特異性：特定的蛋白酶，切割前面含有四個(gè)天冬氨酸的賴氨酸羧基端位點(diǎn)：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 賴氨酸 (D-D-D--D-K)。
純度高：不含其他蛋白酶，無非特異性切割。
無動(dòng)物源性：重組生產(chǎn)，無外源性的病毒污染，生產(chǎn)過程不使用任何動(dòng)物源原料。
質(zhì)量穩(wěn)定：批量生產(chǎn)，可保證穩(wěn)定連續(xù)的批次生產(chǎn)；產(chǎn)品批次間無差異，質(zhì)量穩(wěn)定。
符合法規(guī)要求：生產(chǎn)設(shè)備和生產(chǎn)環(huán)境符合相關(guān)法規(guī)要求，生產(chǎn)過程完全遵循NSF ISO 9001:2015質(zhì)量體系并符合GMP指導(dǎo)原則。
質(zhì)量文件完整：按客戶需求，可提供相關(guān)法規(guī)支持文件。
7.相關(guān)產(chǎn)品
重組羧肽酶B；
序列分析純胰蛋白酶；
重組人胰蛋白酶；
重組抑肽酶。
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