生物制品病毒安全性已經(jīng)越來越被重視，在2017年，國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》生化藥品附錄第五章中，對(duì)病毒去除/滅活及驗(yàn)證的必要性、適用性、有效性等提出具體的要求，明確基于風(fēng)險(xiǎn)控制原則，結(jié)合品種特性和原材料來源，采用有效去除/滅活病毒工藝步驟和方法。
生物制品一般指以微生物、細(xì)胞、動(dòng)物、人源組織或體液等為原料，運(yùn)用傳統(tǒng)技術(shù)或現(xiàn)代生物技術(shù)制備而成，用于人類疾病的預(yù)防、治療、診斷等。目前，生物制品的熱點(diǎn)是生物藥的研發(fā)與申報(bào)，并且許多國家和國際組織已經(jīng)在開展病毒安全性方面的研究，在我國，已經(jīng)制定、發(fā)布和實(shí)施了一些法規(guī)、條例、指南和規(guī)定。
國內(nèi)外在新藥申報(bào)上存在差異，尤其是在病毒去除/滅活工藝的指示病毒方面存在不同。國內(nèi)的指導(dǎo)原則要求，病毒清除驗(yàn)證選擇的指示病毒，至少包括單鏈和雙鏈的RNA及DNA、脂包膜和非脂包膜、強(qiáng)和弱抵抗力、大和小顆粒等病毒。國外則要求盡可能選擇污染產(chǎn)品最相似的病毒進(jìn)行驗(yàn)證，即特異性指示病毒；同時(shí)需要關(guān)注理化性質(zhì)較寬的非特異性病毒。
那么，有哪些指示病毒可以用于病毒去除/滅活工藝呢？
如上表所示，在病毒去除/滅活工藝中會(huì)用到多種指示病毒。按照病毒的核酸類型分類，可以分為DNA指示病毒和RNA指示病毒兩大類。
1. DNA指示病毒
已經(jīng)用于病毒滅活/去除研究的DNA指示病毒，諸如偽狂犬病毒（PRV）、猿猴空泡病毒40（SV40）、（犬、豬）細(xì)小病毒等。
偽狂犬病毒（Pseudorabies Virus，PRV）屬于皰疹病毒科α-皰疹病毒亞科。PRV是有包膜的雙鏈DNA病毒，能夠感染大多數(shù)的哺乳動(dòng)物，在自然條件下，豬、牛、犬、鼠等都可以感染發(fā)病。PRV致病性強(qiáng)，感染性也強(qiáng)，并且死亡率高。豬（包括家豬和野豬）通常是這一病毒的貯存宿主，人類并非潛在的宿主。因此，PRV常用作生物組織提取制品及動(dòng)物源性醫(yī)療器械產(chǎn)品病毒滅活驗(yàn)證中的指示病毒。
猿猴空泡病毒40（Simian vacuolating virus 40，SV40）屬于乳多空病毒科，無囊膜，是最簡(jiǎn)單的雙鏈DNA病毒之一，是一種小型的20面體的蛋白質(zhì)顆粒。SV40的天然宿主是恒河猴。目前，SV40分離株主要是從被污染的**、猴子和人體內(nèi)分離。V40是一種DNA腫瘤病毒，具有一定的整合性。SV40對(duì)紫外線和高溫具有很強(qiáng)的抵抗力，β-丙內(nèi)脂對(duì)該病毒有很強(qiáng)的滅活作用。
單純皰疹病毒（herpes simplex virus，HSV）屬皰疹病毒科的α病毒亞科，病毒顆粒直徑大小約180nm，有囊膜，是嗜神經(jīng)性雙鏈DNA病毒。HSV唯一的自然宿主是人，主要通過直接密切接觸和性接觸傳播。HSV抵抗力較弱，易被脂溶劑滅活。
細(xì)小病毒無包膜，屬于單鏈DNA病毒，對(duì)外界抵抗力較強(qiáng)，對(duì)酒精、乙 醚、氯仿有抵抗性，對(duì)溫度也有一定耐受性。此類病毒的自然宿主較多，比如豬、犬、貓、牛、鼠等，在實(shí)驗(yàn)感染條件下，其宿主范圍還可進(jìn)一步增加。
犬細(xì)小病毒（Canine Parvovirus，CPV）主要的自然宿主是犬，尤其幼犬，傳染性極強(qiáng)，死亡率也高。CPV的傳染途徑一般認(rèn)為是消化道，易感動(dòng)物主要由直接或間接接觸而感染。CPV對(duì)多種理化因素和常用消毒劑具有較強(qiáng)的抵抗力。CPV具有細(xì)小病毒的典型特性，也是常用的指示病毒。
豬細(xì)小病毒（Porcine parvoviurs，PPV）的唯一宿主是豬，且任何階段的家豬和野豬都能夠感染PPV，感染后終生帶毒。PPV對(duì)熱具有強(qiáng)大抵抗力，56℃24小時(shí)病毒的感染性和血凝性均無明顯改變。但0.5%漂白 粉、1%～1.5%氫氧化鈉5分鐘能殺滅病毒。PPV常用作抗性和最小病毒的指示病毒。
2. RNA指示病毒
已經(jīng)使用的RNA指示病毒：水泡性口炎病毒（VSV）、副黏病毒、鼠白血病病毒（MuLV）、辛德比斯病毒（SinV）、牛病**腹瀉病毒（BVDV）、脊髓灰質(zhì)炎薩賓1型病毒（PV1）、腦心肌炎病毒（EMCV）、呼腸孤病毒3型（Reo-3）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、甲型肝炎病毒（HAV）、副流感病毒（PIV）等。
水泡口炎病毒（vesicular stomatitis virus，VSV）粒子為子 彈狀或圓柱狀，是有包膜的負(fù)鏈RNA病毒。VSV能感染多種動(dòng)物和昆蟲，主要感染家畜和馬。VSV在大多數(shù)脊椎動(dòng)物、鳥類、爬行動(dòng)物、魚類及昆蟲的細(xì)胞培養(yǎng)上可以生長(zhǎng)。0.05%結(jié)晶紫可使其失去感染性。VSV常用作有囊膜RNA病毒的指示病毒。
鼠白血病病毒（Murine leukosis virus，MuLV）是哺乳動(dòng)物C型逆轉(zhuǎn)錄病毒的代表種。MuLV可感染大鼠和新生小鼠，可在正常小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)物中良好增殖。也可在大鼠、倉鼠的胚胎細(xì)胞中增殖，并使細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化。MuLV對(duì)乙 醚敏感，對(duì)熱敏感，在50℃水浴中經(jīng)30min即可使病毒滅活。
呼腸孤病毒（Reoviruses，Reo）是具分節(jié)段的雙鏈RNA基因組的一類病毒，病毒粒呈球形，按照血清型屬于3型。Reo病毒分布極廣，包括能感染人、脊椎動(dòng)物、昆蟲、植物的5個(gè)屬。Reo病毒具有較廣的細(xì)胞親嗜性，能在MDEF、CEF、AD293、Marc145、Vero、ST、MDCK等多種細(xì)胞中增殖并產(chǎn)生細(xì)胞病變。Reo對(duì)乙 醚不敏感，對(duì)氯仿輕度敏感，對(duì)pH3有抵抗力，室溫下過氧化氫作用1h不能使其滅活，70%乙醇和0.5%有機(jī)碘可滅活病毒。
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