脂肪酶活力測定是常見的一種測試步驟,測試時用到的試劑與器材有:
1、聚乙烯醇(P. V. P.)橄欖油乳化液:稱取40克聚乙烯醇,加蒸餾水約1000毫升,在小火上加熱,并不停攪拌,至聚乙烯醇全部溶解,冷卻后定容至1000毫升。用雙層紗布過濾,濾液備用。取4%聚乙烯醇溶液150毫升,加50毫升橄欖油,用高速組織搗碎機攪動6分鐘,即成乳白色聚乙烯醇橄欖油乳化液,保存于低溫下(4℃)備用。
2、0.025M磷酸緩沖液(pH7.5)。0.025M磷酸氫二鈉溶液的配置:取Na2HPO4·2H2O 4.45g溶于1L蒸餾水中,0.025M磷酸二氫鈉溶液的配置:取NaH2PO4·H2O 3.45g(或NaH2PO4·2H2O 3.90g)溶于1L蒸餾水中。將0.025M磷酸氫二鈉84ml與0.025M磷酸二氫鈉16ml混合,即為0.025M磷酸緩沖液。
3、0.05N氫氧化鈉標準溶液
4、1%酚酞指示劑:取1g酚酞溶于100ml 70%乙醇溶劑中。
5、95%乙醇 材料: 魚、蝦、貝的肝胰臟、胃、腸標本。 器材: 勻漿器、離心機、恒溫水浴。高速組織搗碎機、酸式滴定管、滴定管架、鑷子、剪子、錐形瓶、移液管、燒杯。
在做實驗時需要重視的注意事項有:
1、使用聚乙烯醇的聚合度為1000-1750,如聚合度低,乳化效果差。橄欖油乳化液在冰箱中保存三天左右仍能保持穩(wěn)定。
2、反應終了加乙醇可停止酶作用和溶解脂肪酸,以利滴定,乙醇用量以不低于總容量60%為宜。
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