2023年05月10日，上海醫(yī)藥行業(yè)協(xié)會官宣發(fā)布了由上海醫(yī)藥行業(yè)協(xié)會組織起草的《免疫細胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)用質粒生產(chǎn)質量管理指南》（T/SHPPA 019—2023）團體標準，該標準于2023年06月01日起實施，此團體標準從機構與人員、廠房與設備、生產(chǎn)管理、物料管理、細菌種子批、工藝控制、質量控制、包裝與貯存、運輸?shù)确矫孢M行了明確和要求，生產(chǎn)企業(yè)可按照本指南的要求，規(guī)范質粒的生產(chǎn)質量管理，進一步確保產(chǎn)品質量，本文梳理了免疫細胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)用質粒GMP管理的主要關注點。
一、免疫細胞治療產(chǎn)品
運載工具——質粒
1、定義
質粒（plasmid），系細菌等生物中染色體以外的環(huán)狀DNA元件，具有自主復制能力，使其在子代細胞中能保持恒定的拷貝數(shù)，并表達所攜帶的遺傳信息。大腸桿菌中的質粒示例圖如下：
大腸桿菌中的質粒（4a.njau.edu.cn:8020/bio/2/3-1-1.htm）
2、運載工具——質粒工作原理
質粒作為體外基因修飾系統(tǒng)的生產(chǎn)用起始關鍵物料，被用于將目的基因轉染到基因修飾載體中（如慢病毒載體），進一步生產(chǎn)免疫細胞治療產(chǎn)品，為了把外源基因裝到質粒上，科學家們先用限制性內(nèi)切酶把質粒的環(huán)切開，然后把外源基因接到環(huán)上。外源基因這種特殊"貨物"被裝上"車"后，再被送入大腸桿菌體內(nèi)。如果在外源基因前面加上一段特殊DNA序列作為翻譯蛋白質的啟動裝置，細菌就會把外源基因翻譯成人們所需要的蛋白質。看來，借助質粒進行的基因運載過程是成功的，外源基因不僅可以到達目的地，而且還保持正常功能。
把目的基因插入質粒的過程（http://www.med66.com）
二、《免疫細胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)用質粒生產(chǎn)質量管理指南》標準信息
三、《免疫細胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)用質粒生產(chǎn)質量管理指南》起草單位、起草人和主要技術內(nèi)容
四、生產(chǎn)用質粒GMP管理有哪些值得關注？
質粒通常不直接作用于免疫細胞治療產(chǎn)品，其生產(chǎn)、檢驗和放行管理應參考《藥品生產(chǎn)質量管理規(guī)范》及其相關附錄的要求，應根據(jù)其使用于不同的研發(fā)階段、不同的基因修飾載體及免疫細胞治療產(chǎn)品及其不同的生產(chǎn)工藝需求，企業(yè)可以根據(jù)風險評估的結果確定生產(chǎn)過程中適用GMP要求的符合程度，全文詳見www.ttbz.org.cn。
1、質粒的生產(chǎn)
質粒生產(chǎn)應依照已批準的工藝規(guī)程和操作規(guī)程進行操作并有相關記錄，確保生產(chǎn)過程的有效控制，持續(xù)、穩(wěn)定地生產(chǎn)出符合質量要求的產(chǎn)品。應重點關注生產(chǎn)用原材料的質量控制、批間差異、雜質水平、工藝中間控制、污染控制等可能影響免疫細胞治療產(chǎn)品安全性、有效性的因素；如質粒生產(chǎn)應在受控環(huán)境中進行，環(huán)境需采取有效控制措施并進行日常監(jiān)測，以盡可能降低環(huán)境微生物及顆粒等對產(chǎn)品可能造成的污染，操作環(huán)境的潔凈度級別以無菌質粒產(chǎn)品生產(chǎn)操作為例，宜按照下表中的示例進行選擇：
2、質粒的質量控制
1) 應重點關注安全性和轉染有效性相關項目，如超螺旋比例、宿主DNA殘留、宿主RNA殘留、宿主蛋白殘留等。
2) 對質粒逐批進行檢驗。一般包括以下項目：理化(外觀、pH)、質粒濃度或含量、鑒別(限制性內(nèi)切酶分析、序列鑒定)、純度與雜質(Aaso/Azs、超螺旋比例、宿主菌DNA殘留、宿主菌RNA殘留、宿主蛋白殘留、抗生素殘留(如適用)等)、無菌及細菌內(nèi)毒素等。
3) 應根據(jù)質粒在最終的免疫細胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)中的功能及安全性等相關因素，經(jīng)風險評估建立合理的質粒質量標準；可參照《中國藥典》的相關要求，進行檢測方法的驗證或確認。
4) 應對質粒的穩(wěn)定性進行長期監(jiān)測，選擇合理、敏感的考察項目(如外觀、pH、濃度/含量、純度(Aaeo/As)、超螺旋比例等),并根據(jù)相關數(shù)據(jù)制定或調(diào)整質粒的貯存條件和有效期。
3、質粒的質量保證
1) 應重點關注如質粒生產(chǎn)或質量控制發(fā)生變更，應進行充分研究和評估，關注變更對質粒質量的影響，也應將對體外基因修飾系統(tǒng)及免疫細胞治療產(chǎn)品的影響納入考慮范圍。
2) 應當制定質粒生產(chǎn)工藝規(guī)程并經(jīng)過批準，工藝規(guī)程中應明確質粒產(chǎn)品的關鍵質量屬性(如適用)、生產(chǎn)工藝流程、關鍵工藝參數(shù)和控制范圍、中間控制項目及控制標準。應制定生產(chǎn)操作規(guī)程，對生產(chǎn)操作步驟等進行詳細說明，以確保生產(chǎn)過程的有效運行和有效控制。
3) 生產(chǎn)工藝過程中任何偏離生產(chǎn)工藝規(guī)程的情況均應當有記錄，應對偏差進行評估、調(diào)查并制定糾正和/或預防措施，有效防止類似偏差的再次發(fā)生。
質粒產(chǎn)品的運輸和轉運的方式應有明確的操作規(guī)程進行規(guī)定，運輸?shù)姆绞綉M行驗證和確認(如適 用),整個運輸過程應有完整的記錄。
參考文獻
[1] www.ttbz.org.cn等
作者簡介
滴水司南，男，生物醫(yī)藥高級工程師，立足于生物醫(yī)藥行業(yè)質量管理工作，專注于生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)。
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