佐劑又稱免疫調(diào)節(jié)劑或免疫增強劑，是一種用于疫苗中的添加劑，佐劑在先于抗原或與抗原混合注入機體后能夠增強機體對抗原的免疫應(yīng)答或改變免疫反應(yīng)的類型。佐劑屬于非特異性的免疫增強劑，其本身不具備抗原性。一個理想的佐劑不僅能夠增強免疫反應(yīng)，還能使機體獲得最 佳的保護性免疫。除了上文介紹的鋁鹽佐劑、蛋白類佐劑、核酸類佐劑，本文將繼續(xù)介紹含脂類佐劑、新型油乳佐劑、其他佐劑以及復合佐劑等。

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       4、含脂類佐劑及其作用機制

       脂類佐劑包括脂多糖（LPS）和脂質(zhì)體兩類。脂多糖天然存在于革蘭氏陰性菌的外膜中，是天然免疫系統(tǒng)的強激活劑，也是細菌感染后引起適應(yīng)性免疫反應(yīng)的關(guān)鍵因素。脂多糖通常由3個部分組成：多糖O抗原、核心寡糖和疏水性脂質(zhì)A。哺乳動物免疫細胞通過模式識別受體復合體Toll 樣受體4 (TLR4)/髓樣分化蛋白2 (MD-2) 識別脂質(zhì)A來激活免疫細胞并釋放炎癥細胞因子，脂質(zhì) A 是天然免疫的有效誘導劑和免疫應(yīng)答的有效增強劑。研究人員使用 LPS 作為百日咳疫苗的佐劑來免疫小鼠，實驗結(jié)果顯示，LPS 不僅提高了疫苗的免疫效率，還減少了I 型超敏反應(yīng)的發(fā)生。然而，由于高毒性，基于脂質(zhì) A的佐劑被認為不適合用于人類疫苗。LPS 是已知最活躍的病原體相關(guān)分子模式之一，針對 LPS 進行化學或遺傳修飾以降低其毒性是其在佐劑應(yīng)用中的關(guān)鍵。GLA-SE和GLA-AF是脂質(zhì) A 的類似物，在增強對H5N1的保護方面特別有效，并且毒性低、副作用少。GLA-AF 也被嘗試作為許多疫苗中乳液的替代品，其中最引人注目的是大流行性流感疫苗。含脫?；瘑瘟字珹的佐劑系統(tǒng)與乙型肝炎表面抗原聯(lián)合使用，可以以更快的速度誘導更高的抗體效價，并能持續(xù)更長時間的保護。

       脂質(zhì)體是由天然產(chǎn)物中的非免疫原性、無毒性和可生物降解的磷脂組成的能夠包裹抗原的球體，可作為抗原遞送類佐劑，充當遞送疫苗的工具。脂質(zhì)體作為疫苗載體系統(tǒng)的一個關(guān)鍵優(yōu)勢是它的多功能性和可塑性。利用其化學性質(zhì)，水溶性抗原 (蛋白質(zhì)、肽、核酸、碳水化合物、半抗原) 被包埋在脂質(zhì)體的水性內(nèi)部空間中，而親脂化合物 (脂肽、抗原、佐劑、連接分子) 被嵌入到脂質(zhì)雙層中，同時抗原或其他佐劑可以通過吸附或穩(wěn)定的化學連接附著到脂質(zhì)體表面。DNA 疫苗被包裹在脂質(zhì)體中，可以更有效地穿過細胞膜到細胞內(nèi)進行表達，脂質(zhì)體在這個過程中起到保護和緩釋作用。脂質(zhì)體可以被免疫刺激分子和靶向分子進行修飾，作為一種多功能疫苗佐劑傳遞系統(tǒng)參與免疫過程，它們能靶向免疫細胞甚至細胞器，產(chǎn)生溶酶體逃逸，促進抗體的交叉表達，從而極大地提高疫苗的免疫效果。研究表明，脂質(zhì)體能夠增強機體的體液免疫應(yīng)答和細胞免疫應(yīng)答。脂質(zhì)體與弗氏試劑或氫氧化鋁聯(lián)合使用具有協(xié)同增效的效果。脂質(zhì)體廣泛應(yīng)用于COVID-19 疫苗、腫瘤疫苗和流感疫苗等臨床試驗中。但作為佐劑，脂質(zhì)體也存在一些不足，例如在儲存過程中，磷脂中的不飽和脂肪酸會逐漸氧化；脂質(zhì)體易發(fā)生融合，在相互融合過程中可以導致包裹的抗原釋放出來；同時脂質(zhì)體制備的技術(shù)性較高，費用也較高。目前通過對脂質(zhì)體不斷研究，已經(jīng)設(shè)計出幾種新型脂質(zhì)體，例如超可變形囊泡 (Transfersome)、雙層間交聯(lián)的多層囊泡和固體核心脂質(zhì)體等來用于疫苗遞送。

       5、新型油乳佐劑及其作用機制

       目前FDA批準上市的新型油乳佐劑代表是MF59佐劑和AS03 佐劑。MF59是在高壓條件下將角鯊烯、吐溫-80、山梨糖醇三油酸酯混合后形成的均勻滴狀乳液，能誘導機體產(chǎn)生較強的體液免疫應(yīng)答。MF59通過誘導趨化因子循環(huán)，使小鼠體內(nèi)的免疫細胞發(fā)生改變，刺激體內(nèi)的免疫應(yīng)答，進而誘導單核細胞向DC分化，為機體提供有效的免疫環(huán)境，并在免疫后增加IgG抗體的含量。MF59主要用于流感疫苗，它可增強機體免疫應(yīng)答，提高流感毒株的交叉反應(yīng)性。研究表明，加入此佐劑后，面對H7N9禽流感疫情大規(guī)模暴發(fā)，即使在抗原使用量降為原來的1/4到1/2的情況下，以 MF59為佐劑的裂解疫苗仍可有效抵抗H7N9禽流感病毒的感染。MF59也有助于增強幼兒和老年人季節(jié)性或大流行性流感疫苗的療效。在老年人的三價疫苗中，MF59還能誘導比鋁佐劑更強烈的體液免疫反應(yīng)，可用作新型冠狀病毒?。–OVID-19）亞單位疫苗的佐劑，通過肌內(nèi)注射可增強基于嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒2型（SARS-CoV-2）蛋白的亞單位疫苗的免疫原性。

       AS03是另一種基于油包水乳液的佐劑。歐洲委員會于2009 年授予AS03佐劑的帕德米克斯（Pandemrix）上市許可。2013 年，美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準了AS03 佐劑的流感 A（H5N1）單價疫苗。自此，AS03 在流感疫苗和瘧疾疫苗中開始發(fā)揮越來越重要的作用。AS03由表面活性劑聚山梨酯80 和兩種可生物降解油（即角鯊烷和DL-a-生育酚）組成。DL-a-生育酚是維生素E中生物利用率最高的形式，研究表明，添加DL-a-生育酚能夠改變先天免疫反應(yīng)的特征，提高抗體反應(yīng)。AS03可以在肌肉和引流淋巴結(jié)（dLN）中誘導細胞因子和趨化因子的產(chǎn)生，引發(fā)單核細胞、樹突狀細胞和粒細胞向dLN的遷移，刺激CD4+ T細胞特異性免疫應(yīng)答。

       6、其他佐劑

       病毒樣顆粒（Viral-like particles VLPs）是由病毒殼蛋白自組裝而成的多聚體顆粒，具有適合的尺寸和幾何形狀，可作為有效的疫苗抗原遞送平臺。VLPs 通常大小為20 ~ 100 nm，便于進入淋巴血管并靶向淋巴結(jié)，從而被專門的抗原呈遞細胞（APCs）攝取。由于其高度重復和剛性的結(jié)構(gòu)，VLPs 能夠在其表面展示多價抗原表位，有效地結(jié)合B細胞受體（BCRs），激活B 細胞，并誘導強而持久的抗體反應(yīng)。VLPs 已成功應(yīng)用于人乳頭狀瘤病毒（HPV）和乙型肝炎病毒等疫苗的開發(fā)，并已經(jīng)廣泛上市。此外，VLPs 還可以傳遞內(nèi)源性和異源性抗原，在其表面進行化學偶聯(lián)或基因融合修飾。研究表明，VLPs 已成功用于寨卡病毒、流感、癌癥和腦炎等疫苗的臨床試驗。

       皂苷（Saponins）是螺旋甾烷類化合物或三萜的天然糖苷，可激活哺乳動物的免疫系統(tǒng)。天然植物中提取的皂甙與細胞膜上的膽固醇形成復合物，能共同促進 T、B 淋巴細胞增殖，誘導產(chǎn)生特異性 MHC-I 抗原限制性 CTL，刺激分泌多種細胞因子，因此可以作為佐劑使用。QuilA及衍生物QS-21 是具有佐劑活性并應(yīng)用最廣的皂苷類佐劑，可以用來修飾 T 細胞和抗原呈遞細胞。QuilA 既能使外源性抗原刺激機體 Th1 免疫應(yīng)答，也能誘導CTL 應(yīng)答，目前已成為亞單位疫苗及癌癥疫苗的理想佐劑。

       復合佐劑

       隨著新型疫苗的發(fā)展，單一功能的佐劑往往不能滿足人們需要，因此就要利用不同成分佐劑之間的協(xié)同作用。復合佐劑就是為了最大 程度地發(fā)揮佐劑效應(yīng)，將起不同免疫效果的兩種或多種的佐劑進行搭配使用，佐劑的復合可以進一步地調(diào)節(jié)或增強免疫應(yīng)答，起到更強的免疫保護作用。

       AS佐劑系統(tǒng)由葛蘭素史克公司于20世紀80年代末開發(fā)，主要用于增強疫苗的免疫原性和免疫反應(yīng)。AS佐劑系統(tǒng)的主要成分是脂多糖 (MPL)，MPL與其他輔助成分一起組成了一種能夠有效激活免疫反應(yīng)的配方。AS 佐劑系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于多種疫苗的開發(fā)和生產(chǎn)中，包括百日咳疫苗、流感疫苗、肺炎球菌疫苗等。通過加入AS佐劑系統(tǒng)，這些疫苗能夠在接種后引發(fā)更強的免疫反應(yīng)，提高免疫保護水平。AS佐劑系統(tǒng)還能夠幫助延長疫苗的免疫效果，提供更持久的免疫保護。目前 FDA 已批準 AS01、AS03和AS04 佐劑系統(tǒng)上市。

       Covaxin( BBV152)是一種以鋁-TLR7/8激動劑為復合佐劑的滅活新型冠狀病毒疫苗， 于2021年獲得世界衛(wèi)生組織緊急使用授權(quán)。Covaxin誘導的中和抗體水平是鋁佐劑滅活疫苗的1.5倍，TLR7/8激動劑有助于刺激Th1 細胞偏向免疫，增強了Covaxin誘導CD8+ T 細胞反應(yīng)的能力。SCB-2019新型冠狀病毒疫苗于2022年在中國獲批緊急使用，疫苗中使用了 CpG1018-明礬的復合佐劑，在Ⅰ期臨床試驗中，CpG1018-明礬疫苗在成人和老人中首次免疫后36d的血清轉(zhuǎn)化率均達到100%，高于無佐劑疫苗組，并且誘導了高水平的中和抗體。SCB-2019新型冠狀病毒疫苗的Ⅱ /Ⅲ期臨床試驗也證明了接種2劑次疫苗可以對人體產(chǎn)生針對新型冠狀病毒有效的保護作用，對由任何新型冠狀病毒毒株引起的危重癥感染、中度至重度感染和有癥狀感染的保護效力分別為100%、83.7%和67.2%。

       AS37是將合成的 TLR7a( TLR7 激動劑) 吸附于氫氧化鋁上構(gòu)成的新型復合佐劑，能夠增強Th1 細胞偏向的免疫反應(yīng)。AS37 復合佐劑在 C 群腦膜炎球菌結(jié)合疫苗的臨床前小鼠實驗中展現(xiàn)出了良好的佐劑效果，三種劑量的AS37 佐劑疫苗組在初次免疫后均可顯著增加抗 C 群腦膜炎奈瑟菌血清殺菌活性效價值，高于明礬佐劑疫苗組，并且在第2劑次免疫后8個月，三種劑量的AS37 佐劑疫苗組抗 C 群腦膜炎奈瑟菌血清殺菌活性效價值均保持在較高水平。

       皮卡（PIKACA）是我國獨有的一種用于人體的疫苗佐劑，它是由雙鏈聚肌苷酸、卡那霉素、氯化鈣組成的復合物。2018年國家藥品監(jiān)督管理局批準了人用皮卡狂犬病疫苗的臨床試驗。人用皮卡狂犬病疫苗接種后2h即產(chǎn)生高滴度的IFN，同時增強機體的體液免疫，提升其免疫效力甚至比疫苗與抗血清的結(jié)合效果更好。目前國外已完成人用皮卡狂犬疫苗的Ⅰ期和Ⅱ期臨床試驗，我國也在進行Ⅰ期臨床。

       參考資料

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       [4]夏芯,朱雅文,周利等.疫苗新型佐劑的作用機制和研發(fā)進展綜述[J].中國疫苗和免疫,2023,29(04):474-482.

       [5]張榮,李菁,武永淑,李小明,董金杰,劉學榮.新型疫苗佐劑的研究進展[J].中獸醫(yī)學雜志,2021,(第3期).

       作者簡介：小泥沙，食品科技工作者，食品科學碩士，現(xiàn)就職于國內(nèi)某大型藥物研發(fā)公司，從事營養(yǎng)食品的開發(fā)與研究。