2023年4月24日，國家藥典委員會官網(wǎng)發(fā)布“關(guān)于通則0502 薄層色譜法修訂草案的公示”，擬對2020年版《中國藥典》第四部第59頁收入的方法——0502 薄層色譜法部分內(nèi)容進行修訂，公示期自發(fā)布之日起3個月。薄層色譜法是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實驗技術(shù)，是藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測定的常用方法之一。
一、了解薄層色譜法常用專業(yè)術(shù)語
1.薄層色譜法（Thin-layer chromatography, 簡稱TLC)：
系將供試品溶液點于薄層板上，在展開容器內(nèi)用展開劑展開，使供試品所含成分分離，所得色譜圖與適宜的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)按同法所得的色譜圖對比，亦可用薄層色譜掃描儀進行掃描，用于鑒別、檢查或含量測定。
2.薄層色譜掃描法：
系指用一定波長的光照射在薄層板上，對薄層色譜中可吸收紫外光或可見光的斑點，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點進行掃描，將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于鑒別、檢查或含量測定?？筛鶕?jù)不同薄層色譜掃描儀的結(jié)構(gòu)特點，按照規(guī)定方式掃描測定，一般選擇反射方式，采用吸收法或熒光法。除另有規(guī)定外，含量測定應(yīng)使用市售薄層板。
3.比移值（Rf）：
系指從基線至展開斑點中心的距離與從基線至展開劑前沿的距離的比值。
二、常見的薄層色譜法儀器，你認(rèn)識幾種？
在藥品檢測領(lǐng)域，有“四大名譜”，它們分別為色譜、光譜、質(zhì)譜、波譜，可以說只要有分析任務(wù)的地方都在使用色譜分析法，薄層色譜法（ TLC）因其操作簡單、成本低廉、靈敏度高、分離速度快、可同時分析多個樣品而成為目前應(yīng)用最廣泛的分離技術(shù)之一，常見的薄層色譜法儀器分別是：
1)薄層板：按支持物的材質(zhì)分為玻璃板、塑料板或鋁板等；按固定相種類分為硅膠薄層板、鍵合硅膠板、微晶纖維素薄層板、聚酰胺薄層板、氧化鋁薄層板等。
2)點樣器： 一般采用微升毛細(xì)管或手動、半自動、全自動點樣器材。
3)展開容器：上行展開一般可用適合薄層板大小的專用平底或雙槽展開缸，展開時須能密閉。水平展開用專用的水平展開槽。
4)顯色裝置：噴霧顯色應(yīng)使用玻璃噴霧瓶或?qū)Ｓ脟婌F器，要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細(xì)霧狀噴出；浸漬顯色可用專用玻璃器械或用適宜的展開缸代用；蒸氣熏蒸顯色可用雙槽展開缸或適宜大小的干燥器代替。
5)檢視裝置：為裝有可見光、254nm 及 365nm 紫外光光源及相應(yīng)的濾光片的暗箱，可附加攝像設(shè)備供拍攝圖像用。暗箱內(nèi)光源應(yīng)有足夠的光照度。
6)薄層色譜掃描儀：系指用一定波長的光對薄層板上有吸收的斑點，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點，進行掃描，將掃描得到的譜圖和積分?jǐn)?shù)據(jù)用于物質(zhì)定性或定量的分析儀器。
三、新舊0502 薄層色譜法主要內(nèi)容搶先看
根據(jù)2020年版《中國藥典》實施以來的反饋意見，結(jié)合各國藥典色譜法通則的修訂變化，此次有以下幾項內(nèi)容有發(fā)生變化，紅色字體為刪除內(nèi)容，藍色字體為增訂內(nèi)容變更主要內(nèi)容對照如下：
（一）系統(tǒng)適用性試驗——分離度
定量薄層色譜法的分離度是基于兩相鄰峰（斑點）距離和兩相鄰峰的峰寬計算，此次修訂稿中增加了以半高峰寬計算分離度的公式。但考慮各版《中國藥典》的延續(xù)性，仍保留原有公式作為過渡，并明確當(dāng)有異議時，分離度（Rs）應(yīng)以半高峰寬（Wh/2）的計算結(jié)果為準(zhǔn)，主要修訂內(nèi)容如下：
(3) 分離度（或稱分離效能） 鑒別時，供試品與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜中的斑點 均應(yīng)清晰分離。 當(dāng)在薄層色譜掃描法用于限量檢查和含量測定時， 要求定量待測 峰與相鄰峰之間有較 良好的分離度， 兩峰分離度 (Rs ) 的可用下列計算公式為計算：
式中， 
分別為兩峰的比移值， ；
分別為相鄰兩峰與原點的距離， ；
分別為相鄰兩峰的半高峰寬；
分別為相鄰兩峰的峰寬；
a 為展開劑遷移(展開)距離。
除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.0。
當(dāng)有異議時，分離度(
)應(yīng)以半高峰寬(
)的計算結(jié)果為準(zhǔn)。
式中 d2 為相鄰兩峰中后一峰與原點的距離；
d1 為相鄰兩峰中前一峰與原點的距離；
W1 及 W2 為相鄰兩峰各自的峰寬。
除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于 1.0 。
在用于化學(xué)藥品雜質(zhì)檢查的方法選擇時，可將雜質(zhì)對照品用供試品自身稀釋的對照溶液溶解制成混合對照溶液， 也可將雜質(zhì)對照品用待測組分的對照品溶液 溶解制成混合對照標(biāo)準(zhǔn)溶液， 還可將采用供試品以適當(dāng)的方法降解方法獲得的溶 液作為對照溶液，上述溶液點樣展開后的色譜圖中，應(yīng)顯示清晰分離的斑點。
（二）薄層色譜條件（參數(shù)）
根據(jù)各國藥典，修訂稿增加了薄層色譜條件（參數(shù)）允許調(diào)整的內(nèi)容，并以簡單示例說明如何調(diào)整，主要修訂內(nèi)容如下。
4. 色譜條件調(diào)整
品種正文項下規(guī)定的色譜條件可作如下調(diào)整：
展開劑的組成比例： 占比小的組分，可在相對值±30%或絕 對值±2%范圍， 取較大者進行調(diào)整；其他組分的調(diào)整不得過絕 對值 10%。占比小的組分是指小于 或等于(100/n) %組分， n 是展開劑中各組分個數(shù)。當(dāng)展開劑由 3 個組分組成， 如某組分占比為 10% ，為占比小的組分，其相對值±30%的范圍是 7%~13% ，絕 對值±2%的范圍是 8%~12% ，可在較大的相對值范圍調(diào)整。
除另有規(guī)定外，展開劑中水相組分的 pH 值可在±0.2 pH 單位范圍內(nèi)調(diào)整。 展開劑緩沖組分中鹽的濃度可在原規(guī)定值±10%范圍內(nèi)調(diào)整。
點樣體積： 如使用 2~10μm 的細(xì)顆粒薄層板，可在規(guī)定點樣體積的 10%~20%范圍調(diào)整。
應(yīng)評價色譜條件調(diào)整對分離和檢測的影響，必要時對調(diào)整后的方法進行確 認(rèn)。若調(diào)整超出上述或品種項下規(guī)定的范圍， 將被認(rèn)為是對方法的修改， 需要進 行充分的方法學(xué)驗證。
當(dāng)對調(diào)整色譜條件后的測定結(jié)果產(chǎn)生異議時， 應(yīng)以品種項下規(guī)定的色譜條件 的測定結(jié)果為準(zhǔn)。
參考文獻
[1]www.chp.org.cn
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